28圈

1、生长简史

20世纪60年月末70年月初
，人们致力于研究基因的体外疏散手艺
。Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想
。可是
，其时的基因序列剖析要领尚未成熟
，对热具有较强稳固性的DNA聚合酶还未发明
。1985年
，美国科学家Kary Mullis发明了PCR手艺
，并在Science杂志上揭晓了关于PCR手艺的第一篇学术论文
。以后
，PCR手艺获得了生命科学界的普遍认同
，Kary Mullis也因此而获得1993年的诺贝尔化学奖
。1988年头
，Keohanog通过对所使用的酶的刷新
，提高了扩增的真实性
。此后
，Saiki等人又从生涯在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶
，使得PCR手艺的扩增效率大大提高
。

2、手艺原理

DNA的半保存复制是生物进化和传代的主要途径
。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链
，在DNA聚合酶与启动子的加入下
，凭证碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝
。

在聚合酶链式反应实验中发明
，DNA在高温时也可以爆发变性解链
，当温度降低后又可以复性成为双链
。因此
，通过温度转变控制DNA的变性和复性
，并设计引物做启动子
，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制
。（ DNA高温变性低温复性）

发明耐热DNA聚条约酶#Taq酶关于PCR的应用有里程碑的意义
，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活
，不需要每个循环加酶
，使PCR手艺变得很是简捷、同时也大大降低了本钱
，PCR手艺得以大宗应用
，并逐步应用于临床
。

3、通俗PCR反应流程

4、反应原理

5、PCR循环

6、与荧光定量PCR手艺相较量主要弱点

1、生长简史

界说：在PCR反应系统中加入荧光基团
，使用荧光信号的转变
，通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产品量的转变
，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量剖析
。

2、荧光PCR检测分为两种要领：

荧光探针法和荧光染料法
。

3、荧光探针法检测原理：

6、临床基因检测手艺较量：

要领	原理	适用	优点	弱点	操作	准确性	市场应用
DNA芯片	PCR-芯片杂交	多位点	多基因 ，多为点同时	少数位点	办法多 ，易污染	较高	临床使用
PCR-RFLP	PCR-酶切-电泳	SNP位点	无	多位点	办法多 ，易污染	较高	逐步镌汰
Sanger测序	PCR-测序	SNP位点 ，缺失突变		时间长	办法多	金标准	无注册证
PCR-荧光染料法	荧光PCR	单个基因	快速 ，轻盈	假阳性	简朴一步	高	核酸检测
PCR-荧光探针法	Taqman	SNP ，多态性	快速 ，轻盈	少数位点	简朴一步	高	普及
液相芯片法	PCR-液相杂交	SNP, 多基因 ，多位点		易污染	办法多	较高	非主流